Investigação sobre a Série de Problemas de Qualidade de mRNA
A vacina COVID-19 da Pfizer contém fragmentos de mRNA chamados "mRNA truncado". Este é um problema sério além dos eventos de segurança com risco de vida da vacina. Surpreendentemente, a Pfizer apresentou relatórios analíticos de mRNA falsificados a várias autoridades de saúde.
A questão do mRNA truncado levou a Agência Europeia de Medicamentos (EMA) a levantar uma "grande objeção" antes de sua aprovação condicional da vacina em dezembro de 2020. O que aconteceu? Como essas questões foram consideradas resolvidas? Este artigo da série de duas partes abordará o assunto em profundidade e examinará suas potenciais consequências para a saúde humana.
Resumo dos principais fatos
· A vacina COVID-19 da Pfizer contém mRNA truncado, que a EMA sinalizou como uma razão para sua "grande objeção", indicando uma preclusão de sua aprovação.
· A Pfizer não investigou os resultados prejudiciais do mRNA truncado em suas vacinas.
· A Pfizer submeteu os números do Western blot à Food and Drug Administration (FDA) e à EMA que foram gerados digitalmente – não a partir de experimentos reais.
· Tem havido uma alarmante falta de medidas tomadas pelas autoridades de saúde sobre esta questão.
· O mRNA truncado potencialmente contribui para múltiplas lesões relacionadas à vacina, incluindo coágulos sanguíneos fibrosos induzidos pela proteína spike mal dobrada, distúrbios autoimunes e câncer.
· Esses problemas com a vacina da Pfizer podem ter resultado em variações drásticas de qualidade do produto de lote para lote. Isso poderia explicar a diferença de eventos adversos experimentados pelos receptores da vacina.
· A causa raiz de tal conduta irresponsável por parte das autoridades farmacêuticas e de saúde é a falta de ética.
Quando você vai a um supermercado e quer comprar 10 garrafas de leite integral para seus filhos, você geralmente assume que os produtos químicos e concentrações nessas 10 garrafas são os mesmos ou semelhantes. Ninguém esperaria que cinco das garrafas fossem preenchidas com leite diluído, enquanto as outras cinco estavam cheias de iogurte.
A maioria dos alimentos comprados em lojas atende às nossas expectativas por causa de regulamentos e controle de qualidade. Os mesmos critérios também existem na indústria farmacêutica, incluindo produtos de vacinas.
Esperamos parâmetros físicos e químicos consistentes dos principais ingredientes em diferentes lotes de medicamentos ou produtos de vacinas. A consistência é a base que permite que pacientes e consumidores tenham confiança na segurança e eficácia dos medicamentos.
O processo CMC — abreviação de química, fabricação e controles — envolve a definição de práticas de fabricação e especificações de produtos que devem ser seguidas para garantir a segurança e a consistência do produto entre os lotes. Este é um critério obrigatório para as autoridades de saúde globais aprovarem um medicamento ou vacina.
Controlar a qualidade de um produto químico tradicional é relativamente simples, mas para um produto biológico, como um mRNA, as coisas se tornam mais complicadas.
O que é mRNA truncado? Por que isso importa?
Nosso DNA contém códigos genéticos compostos de nucleotídeos. O DNA produz proteínas que consistem em aminoácidos. Entre o código do gene e a proteína, há uma molécula ponte, um "tradutor" – chamado RNA mensageiro (mRNA).
A sequência de mRNA completa da vacina da Pfizer que codifica a proteína spike tem 4.284 nucleotídeos de comprimento.
Consiste em uma estrutura CAP de 5′ para preparar sua tradução em uma proteína spike. Funciona como uma caixa de ignição de um carro. No final da região traduzível, o quadro de leitura aberto, há um códon de parada, que é como os freios de um carro. Se um mRNA truncado não contém um códon de parada, ele não consegue dar um sinal de "freio". O processo de tradução de proteínas continuará infinitamente.
Uma tradução de mRNA em uma proteína e o papel do códon stop. (Cortesia: Instituto Nacional de Pesquisa do Genoma Humano)
O códon de parada ausente do mRNA truncado é altamente prejudicial para os seres humanos. Pode levar à produção de produtos proteicos tóxicos.
Vacina COVID-19 da Pfizer contém mRNA truncado
A EMA é responsável pela aprovação de todos os medicamentos para uso humano na Europa, incluindo medicamentos e vacinas. O Comité dos Medicamentos para Uso Humano (CHMP) é a comissão da EMA responsável pela interpretação dos pareceres da agência.
Em um relatório de avaliação da EMA codificado EMA/CHMP/448917/2021, a EMA solicitou que a Pfizer abordasse as impurezas de seu produto vacinal, que o relatório da EMA descreveu como "mRNA truncado e modificado".
O relatório da Pfizer para a EMA mostrou claramente que a vacina da Pfizer continha impurezas, conforme indicado pelo "Pico 1" no gráfico abaixo, com base em uma captura de tela da página 14 do relatório de agosto de 2021 da EMA.
A vacina de mRNA da Pfizer contém impurezas. (EMA)
A EMA exigiu que a Pfizer fornecesse dados mensais sobre o potencial de gerar proteínas/peptídeos spike truncados ou outras proteínas/peptídeos que causam condições autoimunes devido a mecanismos de mimetismo molecular. Foi estabelecido um prazo para julho de 2021 e um relatório intercalar deveria ter sido apresentado até março de 2021.
EMA sinalizou mRNA truncado como uma "grande objeção"
Em um relatório de avaliação da EMA sobre "Comirnaty, COVID-19 mRNA vaccine (nucleoside-modified)", codificado como EMA/707383/2020, datado de 19 de fevereiro de 2021, na página 15 sob a seção "Fabricante, controles de processo e caracterização", afirma-se que "Durante o procedimento, várias questões foram destacadas relacionadas ao status GMP da fabricação da substância ativa e dos locais de teste do produto acabado para fins de liberação do lote. Essas questões foram classificadas como uma Objeção Maior (MO)."
Uma "grande objeção" é uma bandeira vermelha regulatória formal da EMA. Se as objecções importantes não forem resolvidas, elas impedem a concessão da autorização de introdução no mercado.
A EMA declarou uma grande objeção em relação à vacina de mRNA da Pfizer. (EMA)
O mRNA truncado foi discutido longamente como uma "Grande Objeção" levantada pela EMA nos dois relatórios da EMA que analisamos acima. Antes que esses agentes biológicos fossem implantados na população global, os revisores da EMA identificaram a questão do mRNA truncado e a trouxeram como uma "grande objeção".
Em junho de 2022, o Trial Site News publicou um relatório investigativo revelando um slide vazado apresentado em uma reunião entre a Pfizer-BioNTech e a EMA. Alexandra (Sasha) Latypova, ex-executiva da indústria farmacêutica que trabalhou com muitas empresas, incluindo a Pfizer, compartilhou o mesmo slide em seu Substack em 10 de janeiro de 2023.
A EMA exigiu que a Pfizer abordasse essas questões: "As formas truncadas devem ser suficientemente caracterizadas, ou seja, devem ser descritas, e deve ser discutido se as espécies fragmentadas devem ser semelhantes entre os lotes. Além disso, deve ser abordada a possibilidade de proteínas traduzidas que não a proteína spike pretendida (S1S2), resultantes de espécies de mRNA truncadas e/ou modificadas, e devem ser fornecidos dados relevantes de caracterização de proteínas, se disponíveis."
A EMA levantou uma grande objeção em relação à qualidade do mRNA. (EMA)
Pfizer reconheceu mRNA truncado em suas vacinas
A Pfizer reconheceu o mRNA truncado em suas vacinas. O mRNA mais truncado tem de 1.500 a 3.500 nucleotídeos de comprimento com 5' CAP, faltando a cauda Poly(A) e o códon de parada. Eles podem ser traduzidos em uma proteína spike parcial.
Infelizmente, quando o mRNA vai até o final da tradução, a cadeia de aminoácidos não interrompe o prolongamento, pois nenhum sinal de parada foi dado a eles. Há muitos mRNA na célula. Como não há sinal de parada, em teoria, outro mRNA em uma célula assumirá o controle e continuará o trabalho inacabado, prolongando a "proteína spike".
Se o mesmo mRNA spike assumir, proteínas prolongadas semelhantes a spikes com múltiplas repetições se formarão. Se diferentes mRNA assumirem o controle, tipos desconhecidos de proteínas serão criados.
O gráfico anotado abaixo é baseado em uma captura de tela da página 15 do relatório da EMA de agosto de 2021.
O pico 1 contém os mRNAs mais truncados de 1.500 a 3.500 nucleotídeos de comprimento. (EMA)
A Pfizer também admitiu que o mRNA truncado estava faltando uma cauda Poly (A). O gráfico anotado abaixo é baseado em uma captura de tela da página 17 do relatório da EMA de agosto de 2021.
O pico 1 está faltando caudas Poly(A). (EMA)
Surpreendentemente, a proporção precisa de impurezas do pico 1 foi apagada neste relatório da EMA baixado.
A tabela anotada abaixo é baseada em uma captura de tela da página 17 do mesmo relatório da EMA.
A porcentagem precisa de Poly(A) no pico 1 foi apagada no relatório EMA baixado. (EMA)
Pfizer submeteu números digitalizados de Western Blot à FDA e à EMA
Um método "Western blot" é usado para identificar proteínas específicas, permitindo que os pesquisadores verifiquem o tamanho e a abundância de uma proteína de interesse.
Devido a preocupações de que a proteína spike incorreta possa causar lesões inesperadas, a EMA exigiu que a Pfizer-BioNTech enviasse resultados experimentais para demonstrar que o RNA truncado da vacina COVID-19 não produziria proteínas fragmentadas.
O pedido da EMA é uma preocupação básica e mínima a ser abordada para qualquer produto de mRNA destinado ao uso humano.
No entanto, como este é o primeiro caso de uso de mRNA como vacina preventiva para uma grande população, esta é também a primeira vez que tal problema de qualidade surgiu. Não temos certeza se havia anteriormente algum padrão de qualidade regulatório para gerenciar o risco de mRNAs truncados.
A única maneira de caracterizar esses fragmentos de RNA é por sequenciamento. A Pfizer não relatou a sequência detalhada de seus mRNAs truncados em seu relatório, apenas o número aproximado de nucleotídeos.
Em dezembro de 2020, a Pfizer forneceu à FDA imagens de Western blots que expressavam os níveis de proteínas spike induzidas pela vacina COVID-19 e afirmou que a vacina não produzia outras proteínas.
Um exemplo de figura gerada pela Pfizer é mostrado abaixo, com base em uma captura de tela da página 39 de um relatório da FDA de 2020. A Pfizer afirmou que avaliou o tamanho da proteína expressa pela vacina de mRNA e concluiu: "O tamanho da proteína expressa é consistente com o tamanho esperado da substância da vacina de mRNA traduzida e comparável em todos os lotes testados".
No entanto, o gráfico aparece digital ou informatizado. Explicaremos o motivo de nossa avaliação mais adiante neste artigo.
2020 Pfizer Western blot. (FDA)
Três outros exemplos de Western blots enviados em 2021 pela Pfizer à EMA são fornecidos abaixo.
Um Western blot mostrou que o mRNA truncado no Pico 1 não gera proteínas in vitro. A figura anotada abaixo é baseada em uma captura de tela da página 19 do relatório da EMA. No entanto, os Western blots são resultados digitais ou computadorizados semelhantes aos apresentados em dezembro de 2020.
Gráfico fictício de Western blot enviado pela Pfizer à EMA. (EMA)
A Pfizer usou os dois gráficos abaixo para explicar que transcritos completos exigem Poly(A) para expressão; no entanto, as Western blots são resultados computadorizados. A figura anotada abaixo é baseada em capturas de tela da página 18 do relatório da EMA de agosto de 2021.
Gráfico fictício de Western blot enviado pela Pfizer à EMA. (EMA)
Gráfico fictício de Western blot enviado pela Pfizer à EMA. (EMA)
As falsas manchas ocidentais da Pfizer foram submetidas a agências reguladoras globais, incluindo pelo menos a FDA, a EMA e a Administração de Bens Terapêuticos (TGA) da Austrália.
Como sabemos que essas manchas ocidentais não são reais?
O primeiro passo na técnica de Western blotting é separar as proteínas em uma amostra usando um processo biológico molecular chamado "eletroforese em gel".
Como diferentes proteínas têm diferentes tamanhos e pesos moleculares, quando são colocadas no mesmo campo elétrico, elas correm a velocidades diferentes de um polo para o outro, como uma corrida de corrida.
No ponto de partida, as proteínas estão juntas em uma linha, como em uma corrida de 400 metros. Dada uma certa quantidade de tempo, as proteínas menores vão mais rápido do que as maiores e, gradualmente, diferentes proteínas se separarão em diferentes locais, chamadas de "bandas". Isso é semelhante ao que acontece em uma corrida de diferentes corredores serão separados um após o outro por sua velocidade em uma corrida de 400 metros.
Fatores que determinam o aparecimento de Western blots incluem a velocidade de transferência de proteínas, tempo de incubação e concentração de anticorpos.
Como resultado, na vida real, as manchas ocidentais raramente são perfeitas; há sempre algumas distorções.
Western blots tipicamente "sorriem" (curvam-se para cima nas bordas) um pouco, sangram com uma cauda e têm bordas arredondadas e barras irregulares. Estes são frequentemente causados por sal nas amostras ou por uma alta concentração das proteínas que transportam cargas elétricas, modificando assim a força do campo elétrico em sua vizinhança e afetando sua migração.
Por exemplo, o gráfico Western blot (abaixo) do relatório da EMA de 2021 parece ser de um experimento real. Um artefato comum, como uma bolha de ar entre o gel e a membrana de mancha, provavelmente causou o ponto de luz perto do centro da Figueira. 8 durante o experimento real. Áreas mais claras e escuras são comuns.
Este é o único gráfico de Western blot no relatório da EMA que parecia ser de um experimento "real". No entanto, a Pfizer não explica por que enviou dois conjuntos de gráficos Western blot à EMA no mesmo relatório sobre a mesma questão.
Exemplo de Western blot dos experimentos Covid-162b2 BNT162b2 da Pfizer. (EMA)
Muitas das manchas ocidentais fornecidas pela Pfizer-BioNTech para suas proteínas spike induzidas pela vacina COVID-19 pareciam estar impecavelmente limpas e perfeitamente retangulares.
Todos os três (figuras 5, 6 e 7) Western blots citados acima parecem falsos – perfeitamente regulares, com todas as bandas permanecendo bem em sua pista; as manchas são totalmente livres de ruído.
A falta de dados experimentais não permite uma conclusão definitiva; No entanto, a EMA aprovou-o
No mesmo relatório, a EMA também escreveu: "É provável que as espécies fragmentadas não resultem em proteínas expressas, devido à sua esperada baixa estabilidade e baixa eficiência translacional (veja abaixo). No entanto, a falta de dados experimentais sobre o RNA truncado e as proteínas expressas não permite uma conclusão definitiva e necessita de uma caracterização mais aprofundada. Por conseguinte, os dados de caracterização adicionais continuam por fornecer como uma obrigação específica (SO1)."
Alguém interpretaria relatórios falsos como dados experimentais confiáveis e confiaria neles para apoiar a aprovação regulatória?
O relatório da EMA de 2021 afirmou que há uma falta de dados para tirar uma conclusão definitiva. (EMA)
No entanto, nas páginas 22 e 23 do relatório da EMA de agosto de 2021, a EMA afirmou que estas questões foram consideradas resolvidas. Como é considerado resolvido? Essa decisão foi baseada naquelas falsas manchas ocidentais?
A EMA concedeu à Pfizer/BioNTech autorização condicional de comercialização em 12 de dezembro de 2020.
Na Parte 2 desta série, continuaremos a discutir as implicações dessa questão da qualidade e o resultado potencial de lesões relacionadas à vacina.
Agradecimento: Obrigado ao Dr. Joe Wang por sua revisão e comentários sobre este artigo.